20.1 果树花粉生活力的测定

一、活动目的

通过本活动，了解应用生物学发芽法进行果树花粉生活力的测定；了解生物科技活动对生产实践具有重要意义。

二、活动设计及原理

在果树杂交工作中，常常需要应用经过贮藏过的、或经过预先处理过的、或经过运输邮寄来的花粉，因而在杂交授粉前必须检查这些花粉是否具有生活力。

在正常条件下，花粉在雌蕊柱头上所具有的萌发能力就称为花粉的生活力。测定花粉生活力的方法有生物学发芽法和化学染色法等。化学染色法比较简单，但它是一种间接测定的方法，准确度不高。生物学发芽法则是测定花粉生活力的常用的也是最为有效的方法，其原理是人为创造一个适于花粉发芽的环境条件，再通过计算花粉发芽的比率来鉴定花粉发芽能力的强弱。人为条件的培养基常用蔗糖配制，其浓度为10～25%。经验表明，不同果树的花粉对蔗糖浓度的要求不完全相同：桃以10%为宜，苹果及梨以10～15%为宜，柑桔一般为10～20%，也有的种类用25%的。也可在培养基中加入1％琼脂，成为蔗糖琼脂培养液。培养基的pH值一般以5.2～6为宜，发芽温度控制在20～25℃，同时要注意保湿。花粉的生活力主要由发芽率的高低来确定，同时还可根据发芽时间的长短、花粉管的长短等情况进行综合评价。

三、活动开展方法步骤

(1)采集当地常见果树成熟、干燥的花粉若干，如桃、苹果梨、柑桔等，并准备培养皿、载玻片（最好是凹式载玻片）、计数器、蔗糖、琼脂、显微镜等器材。

(2)视果树种类的不同而配制不同浓度的蔗糖培养液或琼脂浓度为1%的蔗糖琼脂培养液。

(3)将上述培养液置一滴于载玻片凹孔中或载玻片上，用头发或接种针沾取少许花粉，点播或条播于培养基上。注意使花粉分布均匀，（分散开即可），一般以低倍镜（目镜和物镜均为10倍）下每一视野分布有100～200粒花粉粒为宜。在向蔗糖琼脂培养基上播种时要注意不要把凝固的琼脂培养基滴面弄坏。播种完毕，置于低倍镜下检查，发现过密或过稀时应重做。

(4)将播好花粉的载玻片上贴上标签，放在湿棉花垫底的培养皿中，加盖保湿，保持在20～25℃的温度环境下。

(5)根据不同的种类，保温发芽一定时间后用低倍镜检测发芽情况。通常，苹果、梨、桃的花粉在3～4小时后检查第一次，以后每隔2～4小时检查一次。柑桔一般每隔12小时检查一次。每次检查三个视野，用计数器统计花粉数及发芽数，花粉发芽正常的标志是以花粉管伸长的长度超过花粉直径的长度。

(6)根据花粉发芽率、发芽时间和花粉管的长短等，参照经验，判断花粉生活力的大小。