9.5 微生物的接种

要开展微生物的培养观察活动，就必须有菌种。对初次接触微生物的中学生来说，菌种可以从科研部门、生产单位得到。然而，要想将所得到菌种进行培养和长期保留，就必须学会接种技术，以使菌种能够“传宗接代”。

一、接种的前提条件

要保证接种成功，必须具备两个前提条件。一是要使接种能在无菌的环境中进行，即须在灭过菌的无菌室或接种箱中进行；而且操作者必须用肥皂洗手，须穿着干净整洁的衣服，最好配戴口罩；接种用的各种用具也应经过灭菌。二是要使被接种的培养基完全无菌，即必须将培养基灭菌后方能用于接种。

二、接种方法

微生物的接种方法很多，往往因实验目的不同而有不同的接种方法，如斜面接种法、液体接种法、由液体培养基接种到液体培养基法、以及穿刺接种法等，其中以斜面接种法最为常用。

1.斜面接种法

将微生物从一个斜面培养基接种至另一个斜面培养基上的方法，称为斜面接种法（图9－5）。其方法步骤如下：

首先，点燃酒精灯。将菌种和斜面培养基的两只试管平行放在左手上，用拇指与其它四指夹住，并使中指位于两试管之间，两试管的管口齐平（图9－5①）。

其次，用右手先将棉塞拧转松动，并稍拉出一些，以利接种时拔出（图 9－5②）。

第三，右手持接种针，在酒精灯将针头部分烧红灭菌（图9-5③）。针头以上凡是接种时可能进入试管的部分，均应用火灼烧。

以下操作都要使试管口靠近火旁。

第四，用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞，同时迅速将试管口在酒精灯上烧灼3秒钟左右，使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死（图9－5④）。

第五，将烧过的接种针伸入菌种管内，先将针头接触培养基上没有菌的部位（如斜面的顶端），使其冷却，以免烫死被接种的菌体。然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针抽出试管，接种针抽出时不要使针头部分碰到管壁和管口，取出后，不可使针头通过火焰，更不可触及其它无关物品或桌面（图9-5⑤）。

第六，迅速将接种针伸进另一试管，在培养基上轻轻划线，接种菌体于其上。划线时，要由底部起划较密的平行线，一直划到顶部，以充分利用斜面面积，但不要将培养基划破（图9－5⑥）。

第七，烧灼试管口，将棉塞塞上。塞棉塞时，不要移动试管迎接棉塞，以免试管在移动中纳入可能含菌的空气（图9－5⑦）。

第八，将针头在火焰上烧灼灭菌。放回原处后，腾出手将棉塞塞紧（图9－5⑧）。

2.液体接种法

是一种由斜面菌种接种到液体培养基中的方法。

接种方法与斜面接种法相同，但手持试管时，应使试管略向上斜，以免培养基流出。

将带有菌种的接种针送入液体培养基时，可使针头部分在液体表面与管壁接触的部位轻轻摩擦。接种后，塞上棉塞，烧灼接种针。最后将试管在手掌上轻轻打动，使菌体在培养基中均匀散开。

3.由液体培养基接种到液体培养基法

由于菌种是液体，常应用移液管或无菌滴管接种。无菌操作的注意事项与液体接种法相同，只是移液管、滴管不能在火上烧灼，而要预先经过灭菌。

4.穿刺接种法

是一种由斜面菌种接种到固体深层培养基的方法。

接种方法与斜面接种法相同，但接种针必须很挺直。用接种针取出菌种后，移入固体深层培养基，自培养基中心刺入，直到接近管底，但不要穿透。然后慢慢拔出。这样，可使接种线整齐，易于观察。