9.8 活动方案举例

空气中细菌数目的调查

一、活动目的

通过本项活动，使学生掌握检查空气中细菌数目的方法，并认识细菌菌落的形态特点。

二、活动设计

(1)分别在公园（或田间）、医院（或集市）和学校三种不同环境，用过滤法收集空气中的细菌。

(2)用营养琼脂培养基培养所收集的细菌使之形成菌落。在观察菌落形态的基础上，统计菌落数目，计算每升空气所含细菌数目。

三、活动方法步骤

(1)活动准备

①对无菌室或接种箱进行消毒，并作好接种的各项准备工作。

②制作营养琼脂培养基，装入锥形瓶内，高压蒸汽灭菌后待用。

③对锥形瓶、培养皿、移液管等用具进行灭菌。④组装收集空气中细菌的装置。本项装置所需的用具用品有：

锥形瓶（容量50毫升） 1个

下口试剂瓶（容量5升） 1个

玻璃漏斗（直径6厘米） 1个

橡胶塞（直径与锥形瓶口径、下口试剂瓶的下口口径相同） 2个

玻璃管 约0.5米

乳胶管 约0.5米

小水桶 1个

将上述用具用品按图9－6所示，进行组装

(2)取样。分别在上述三种不同环境中收集空气样品

①架设收集空气中细菌的装置（锥形瓶内应预先装满50毫升无菌水）。

②在试剂瓶内装满4升自来水或清洁的天然水。

③打开试剂瓶底部的阀门，使水缓缓流出（每分钟约10毫升），使外界空气沿漏斗被吸入三角瓶内的无菌水中。当4升水流完后，4升体积空气中的细菌已被滤到50毫升无菌水中（试剂瓶中的水可用小水桶盛接）。

(3)培养。在无菌室或接种箱中，用无菌移液管自锥形瓶内吸取1毫升水样，按无菌操作方法，注入无菌培养皿中，然后加入约45℃的营养琼脂培养基，摇匀，凝固成平板，倒置于28℃温箱或适宜的地方，培养48小时。每种环境中的样品应制作3个培养皿进行培养。

(4)观察。观察细菌菌落形态特征，注意菌落大小、形状、表面、质地和颜色等方面的特点。并进行记录。

(5)计数。按培养基上长出的菌落数（3个培养皿的数目平均）计算出每升空气中细菌的数目。计算公式为：

(6)分析。将三种环境空气中所含细菌数目进行比较，分析数目不同的原因，提出减少空气中细菌数目的措施。

四、注意事项

(1)对三种环境空气采样时，应在同一时间分三组进行，以使三者的采样条件一致。

(2)活动中所用各种用具用品，凡需无菌的均需进行彻底灭菌，接种水样时，一定要按无菌操作方法进行，以保证调查结果的正确性。

(3)取样时，试剂瓶下口流水速度不应过快，应保持每分钟10毫升左右，以使空气中的细菌能全部被过滤到无菌水中。

本章思考题

1.从菌体形态、菌落特征和繁殖方式等方面说明细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的异同。

2.说明培养基配制的过程。

3.说明高压蒸汽灭菌锅的操作方法与注意事项。

4.如何进行斜面接种？

5.连续稀释分离法和平板划线分离法是怎样进行的？

6.为什么观察细菌前必须进行染色？革兰氏染色是怎样进行的？

7.详细说明细菌分离、接种培养和观察的方法步骤。

本章作业

制定一份组织学生参加的“饮用水细菌检查”的活动方案。方案中应写明所需用具用品、取样方法、培养基的配制、培养条件、注意事项等内容。

本章参考书目

1.张景钺 梁家骥 1965 《植物系统学》 人民教育出版社

2.戴方澜 1987 《真菌形态和分类》 科学出版社

3.武汉大学 复旦大学 1979 《微生物学》 人民教育出版社

4.杨颐康 1986 《微生物学》 高等教育出版社

5.钱存柔 董碧虹 1979 《微生物学基础与实验指导》 科学出版社